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【摘要】海参sea cucumber海参胶原肽的功效与作用，holothurians因无脊椎动物棘皮动物门海参胶原肽的功效与作用（开发海参新的食药功效，推动海参产业），其高营养价值和药学价值被列为“八珍”之一。全世界约有800多种海参，中国约有140多种，其中食用者约有40多种。海参Stichopus japonicus生长在中国北部沿海地区，是目前已知营养价值最高的食用海参。海参的体壁是海参的主要食用药用部位，其主要成分为胶原蛋白、酸性粘多糖及海参皂苷。在过去的30年里，有中医单独或联合用药海参治疗肿瘤和糖尿病等取得了良好的疗效。对海参的抗肿瘤、抗凝血和抗菌活性也有报道。但目前国内外对海参活性的研究主要集中在粘多糖、海参素、脂质及微量元素等方面，对海参胶原肽活性的研究尚未见报道。海参胶原与脊椎动物相比，具有明显的难溶性。本文以海参为研究对象，采用生化分离技术提取纯化未变性胶原蛋白，对其生化性质及分子结构性质进行研究。利用市场上销售的酶的胶原酶分解制作活性多肽，调查了抗氧化活性以及控制小鼠B16黑色素瘤细胞株酪氨酸酶活性以及mRNA表达的纳米胶原肽的有效性及作用，使用抗氧化系统决定了活性多肽的结构活性关系。在此基础上，他们进行了动物实验，最终确定了海参中活性成分的特性。
本研究针对进一步丰富胶原蛋白的研究领域，开发海参新的食用药用功效，为推动海参产业的发展提供科学依据。1.对海参体壁营养成分组成的测定表明，海参体壁所含氨基酸种类齐全，氨基酸总量、必需氨基酸总量、鲜味氨基酸总量和药效氨基酸总量分别达到体壁干重的69.9%、19.0%、35.2%和37.6%.活海参体壁水分达91.44%，干物质含量低于体壁10%。粗蛋白质、多糖、脂肪、皂苷和灰分的含量分别为干燥基的70%、13%、1%、0.04%和4.2%。示差扫描热量计（DSC）显示，冻干海参体壁蛋白的热收缩温度（Ts）为67.58℃。Van Gieson染色法观察体壁组织结构，发现胶原纤维和肌原纤维分布在海参体壁的不同位置，其中大部分是胶原纤维，肌原纤维仅含有少量.2.研究了海参胶原蛋白的提取及其生化特性。结果表明，低温萃取可得到胃蛋白酶可溶性及内肽去除酸可溶性胶原蛋白PSC。紫外线可视扫描对PSC的吸收峰为220nm，纯度高。氨基酸分析发现，在1000个氨基酸总残基中，甘氨酸为329个，羟脯氨酸为66个，羟脯氨酸与脯氨酸的比值为0.69，酪氨酸、苯丙氨酸和组氨酸含量较低，可能不含半胱氨酸。
SDS-PAGE电泳谱分析及Sephacryl S-300HR凝胶柱色谱分离胶原链，实验结果表明，PSC分子组成为±13，且链类似脊椎动物Ⅰ型胶原链，分子量约为135kDa。硫酸苯酚法和亚甲蓝法测定的PSC总糖含量分别为0.61%和0.48%。-52的示差热扫描法DSC，将PSC的热稳定性温度Ts测量为57℃，这比牛皮I型胶原低5℃。3.调查了マナマコ胶原蛋白的分子结构。胶原蛋白V8蛋白酶切断肽图的分析表明，海参PSC对V8蛋白酶的敏感性高于牛皮Ⅰ型胶原，与其氨基酸组成存在较多的Glu和Asp有关.PSC的双向电泳图谱表明，海参PSC的等电点约为4.5~6.0，主成分为α1链，MALDI-TOF-TOF质谱仪的测定结果表明，可能存在α1链的肽段为AQVAANTK、YPGCSGSR、IIIDDIR、ELTDVINK、GHVSQHR、YTGGNGVVR、GSGWNGSDAVHTNMTNTR及GTGGNSNK。4.用风味蛋白酶从海参中提取S。从japonicus、Holothuria mexicana以及菲律宾海参Pearsonothria graeffei的体壁中提取胶原肽，并对其性质进行了表征。
用乙醇浸渍法去除皂苷，用300%乙醇沉淀加水分解液中的多糖，可以分批纯化制备纳马科胶原肽。用高效液相色谱法测定肽片段分子量分布，3种胶原肽的主要平均分子量分布为1700D、750D及75D.氨基酸组成测定表明，三种海参胶原肽中氨基酸种类完整，海参、墨西哥、菲律宾海参的氨基酸总量分别为胶原肽干重的99.21%、98.72%和50.27%。所需氨基酸总量占胶原肽干燥重量的25.01%、15.41%、12.57%。鲜味氨基酸总量分别占胶原蛋白肽干重的53.82%、56.1%和26.32%。药效氨基酸总量分别占胶原肽干重量的54.35%、51.65%和26.12%，表明纳米胶原肽具有极高的营养和医学价值。5.三种胶原肽对超氧阴离子O2·-和羟基自由基·OH的去除作用表明，三种胶原肽均能有效去除超氧阴离子自由基和羟基自由基，去除作用随着浓度的增大而增强。海参对超氧阴离子的去除效果最好，IC50为2.18mg/mL; Mexicana在去除羟基自由基方面表现最好，IC50为0.20。6.用氧― LDL建立血管内皮细胞氧化损伤模型，观察并比较了3种纳米胶原肽对血管内皮细胞的保护效果。
通过紫外线模拟日光诱导小鼠皮肤光老化模型，研究了海参胶原肽对皮肤光老化小鼠抗氧化及免疫功能的调节作用.结果表明，マナマコ胶原肽可显著降低紫外线老化模型小鼠血清及皮肤中MDA含量，增加羟基丙氨酸含量皮肤，提高SOD及GSH-px活性.紫外线衰老模型小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力显著增强，小鼠脾脏指数及胸腺指数、脾脏B淋巴细胞及脾脏T淋巴细胞性状转换数增加P0.05、P0.01.8.通过对小鼠B16黑色素瘤细胞株进行体外培养，研究了马纳马科胶原肽对B16细胞酪氨酸酶活性及mRNA表达的调控。结果表明，海参胶原肽能显著促进B16细胞的生长，P0.05、P0.01，剂量效应关系明显.低浓度胶原肽对酪氨酸酶活性抑制无显著效果，胶原肽浓度为100g/mL时，酪氨酸酶活性抑制率高达21.17%p0.01，受到浓度依赖性抑制。可抑制小鼠B16F10细胞酪氨酸酶mRNA的表达，随着纳马科胶原浓度的增加，抑制率从25μg/mL的36.79%增大到100μg/mL的69.69%，其作用途径与酪氨酸酶的产量和活化抑制有关。 版权声明：本内容由互联网用户提供，本意见仅代表作者。本网站不拥有所有权，也不承担任何法律责任。如果发现侵权/违规内容，联系网站将立即删除。